花卉城

植物莖尖組培實(shí)驗(yàn)過(guò)程--1、外植體的選取及預(yù)處理

⑴外植體選取

選取生長(zhǎng)健壯、已發(fā)芽、長(zhǎng)勢(shì)較好、無(wú)病害的生姜根狀莖作為外植體。

⑵材料預(yù)處理

取帶芽的枝條或鱗莖球莖，洗衣粉適量沖洗，然后扳取或用清潔剪刀剪取帶芽部位（約1cm×1cm大�。斞亢鸵秆�、大芽和小芽分開。繼續(xù)用洗衣粉清洗10分鐘，清洗時(shí)需不�；蝿�(dòng)。再用自來(lái)水沖洗干凈，置空培養(yǎng)瓶備用。

2、超凈工作臺(tái)無(wú)菌操作準(zhǔn)備

檢查超凈工作臺(tái)，是否已開機(jī)滅菌，酒精燈、酒精瓶、升汞是否齊備、無(wú)菌水、培養(yǎng)瓶放置與位置、接種器械是否齊備與放置。

3、外植體消毒

⑴蒸餾水沖洗

外植體置于已殺菌開機(jī)的超凈工作臺(tái)上，新潔爾滅洗液消毒雙手，無(wú)菌蒸餾水清洗外植體2-3次，需隨時(shí)晃動(dòng)。

⑵酒精消毒

75%酒精倒入裝外植體的容器內(nèi)，消毒外植體5-60s，時(shí)間長(zhǎng)短視植物材料情況而定，一般幼嫩材料和室內(nèi)帶菌培養(yǎng)材料消毒時(shí)間短，老材料或室外材料消毒時(shí)間長(zhǎng)。動(dòng)作一定迅速，需晃動(dòng)，然后將酒精倒去。整個(gè)時(shí)間計(jì)算以酒精傾倒開始至酒精倒出瓶外為止，

⑶升汞消毒

1%生汞倒入裝外植體的容器內(nèi)，消毒外植體5-10min，時(shí)間長(zhǎng)短視情況而定。需晃動(dòng)，在較后3min靜置，升汞注滿容器，將已灼燒的鑷子放入容器升汞內(nèi)浸泡。

10%次氯酸鈉溶液倒入裝外植體的容器內(nèi)，消毒外植體10-12min，時(shí)間長(zhǎng)短視情況而定。

⑷蒸餾水清洗

用鑷子將外植體取出，放入另一無(wú)菌蒸餾水瓶中清洗，反復(fù)清洗4次。

4、材料的整理

用灼燒冷卻的鑷子和剪刀對(duì)外植體進(jìn)行處理，剝離外植體材料芽外部小葉片，露出尖端生長(zhǎng)點(diǎn)和2-3片葉原基部分，將此部分剪下做培養(yǎng)材料。再用無(wú)菌蒸餾水清洗3-4次。

5、接入培養(yǎng)基

培養(yǎng)基瓶放入工作臺(tái)內(nèi)，將剝離的材料分別用消毒過(guò)的鑷子放入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，蓋上瓶蓋，置培養(yǎng)籃內(nèi)，寫上培養(yǎng)時(shí)間、操作人及培養(yǎng)品名，入培養(yǎng)室培養(yǎng)。